Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sg II: sc-402906-ACT

SCG2 code la sécrétogranine II (Sg II), un membre de la famille des granines, localisée dans les granules sécrétoires à cœur dense des cellules neuroendocrines et des neurones, où elle soutient l’exocytose régulée. Le traitement protéolytique de Sg II génère des peptides bioactifs tels que la sécrétoneurine, qui modulent la chimiotaxie, la croissance des neurites et la dynamique de la voie sécrétoire, reliant ainsi SCG2 à la biogenèse des vésicules, à l’acidification des granules et à la sécrétion couplée aux stimuli. Par ces fonctions, l’activité de SCG2 s’inscrit au croisement des réseaux de signalisation neuroendocrinienne et des voies de trafic des cellules inflammatoires. Des altérations de l’expression de SCG2 et des profils de peptides de granines ont été rapportées dans divers contextes, notamment la biologie des tumeurs neuroendocrines et les dysfonctionnements sécrétoires associés à des maladies neurologiques et métaboliques, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud mécanistique pour les études centrées sur la sécrétion.

Sg II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SCG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sg II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SCG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SCG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sg II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SCG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sg II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sg II dans les cellules tumorales présentant une expression de SCG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.