Plásmido CRISPR de Activación (h) SF2/ASF: sc-400737-ACT

El gen humano **SRSF1** codifica el factor de empalme rico en serina/arginina **SF2/ASF**, un componente central del espliceosoma que regula el empalme constitutivo y alternativo del pre-ARNm, la exportación de ARNm y la traducción. SF2/ASF ayuda a determinar la selección de isoformas en vías que controlan la progresión del ciclo celular, la apoptosis y las respuestas al estrés, y puede influir en redes de señalización como **PI3K–AKT** y **MAPK** mediante la reconfiguración, dependiente del empalme, de componentes de la vía. La expresión o actividad alterada de SRSF1 se asocia con cambios generalizados del transcriptoma, inestabilidad genómica y una salida del proteoma desregulada observadas en múltiples contextos relevantes para enfermedades, incluida la biología del cáncer y la neurodegeneración. Como regulador prototípico del empalme, SRSF1 se estudia con frecuencia por su papel en la definición de exones, la especificidad de unión al ARN y el acoplamiento entre la transcripción y el empalme.

SF2/ASF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SRSF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SF2/ASF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SRSF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SRSF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SF2/ASF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SRSF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SF2/ASF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SF2/ASF en células tumorales con expresión de SRSF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.