Particules Lentivirales d'Activation (h) SETD4: sc-403788-LAC

SETD4 code une lysine méthyltransférase contenant un domaine SET, impliquée dans la régulation de la chromatine et le contrôle transcriptionnel via des mécanismes dépendants de la méthylation des histones. En modulant l’état épigénétique, SETD4 est associée à des processus cellulaires tels que la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et des programmes d’expression génique spécifiques de lignée. Une régulation altérée des modificateurs de la chromatine, dont SETD4, est fréquemment liée à des phénotypes de prolifération et de différenciation dérégulées, en oncologie comme dans des contextes développementaux. L’étude fonctionnelle de SETD4 soutient les travaux sur les réseaux épigénétiques qui façonnent les sorties transcriptionnelles dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SETD4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SETD4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SETD4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SETD4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SETD4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SETD4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.