Plasmide CRISPR d'Activation (h) SETD4: sc-403788-ACT

Le gène humain **SETD4** code une protéine contenant un domaine SET, impliquée dans la régulation de la structure de la chromatine et des programmes transcriptionnels dépendante de la méthylation des lysines. En tant que « writer » épigénétique putatif, SETD4 est étudiée dans le contexte du remodelage de la chromatine, du contrôle du cycle cellulaire et de l’expression génique associée aux lignages, où des modifications de la dynamique de méthylation peuvent remodeler l’état cellulaire. La dérégulation de l’expression ou de l’activité de SETD4 a été examinée en lien avec des phénotypes de prolifération et une reprogrammation transcriptionnelle pertinents pour la biologie du cancer et d’autres maladies caractérisées par des perturbations épigénétiques. Ces caractéristiques font de SETD4 une cible utile pour des études mécanistiques reliant la signalisation associée à la chromatine aux réseaux de régulation génique.

SETD4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SETD4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SETD4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SETD4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SETD4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SETD4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SETD4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SETD4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SETD4 dans les cellules tumorales présentant une expression de SETD4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.