Plasmide CRISPR d'Activation (h) SET7/9: sc-405251-ACT

La SETD7 humaine (SET7/9) est une lysine méthyltransférase contenant un domaine SET qui monométhyle principalement l’histone H3 sur la lysine 4 (H3K4me1) et peut également modifier des substrats non histoniques, reliant l’état de la chromatine au contrôle transcriptionnel. Grâce à ces activités épigénétiques et de méthylation des protéines, SET7/9 influence la progression du cycle cellulaire, les programmes de différenciation, les réponses au stress et la régulation des gènes métaboliques. La signalisation dépendante de SETD7 s’entrecroise avec des voies contrôlées par d’importants facteurs de transcription et des nœuds régulateurs, façonnant des profils d’expression génique spécifiques au contexte. Une activité ou une expression dérégulée de SETD7 a été associée à des réseaux transcriptionnels altérés observés dans des modèles de biologie des cancers, d’inflammation et de maladies cardiométaboliques, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation épigénétique.

SET7/9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SETD7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SET7/9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SETD7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SETD7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SET7/9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SETD7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SET7/9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SET7/9 dans les cellules tumorales présentant une expression de SETD7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.