Set1A Lentiviral Activation Particles (h): sc-406841-LAC

Humanes SETD1A kodiert Set1A, eine katalytische Komponente des COMPASS-Komplexes, der die Methylierung von Histon H3 an Lysin 4 (H3K4) katalysiert, mit einer besonders wichtigen Rolle für H3K4me3 an aktiven Promotoren. Durch die Koordination mit der Transkriptionsmaschinerie der RNA-Polymerase II und chromatinassoziierten Kofaktoren trägt Set1A zur Regulation der Chromatinzugänglichkeit im promotorproximalen Bereich, der Transkriptionsinitiation und von Genexpressionsprogrammen bei, die Proliferation und Linienspezifizierung steuern. Die SETD1A-abhängige Chromatinregulation überschneidet sich mit der DNA-Schadensantwort, der replikationsassoziierten Chromatinaufrechterhaltung und neuroentwicklungsbezogenen transkriptionellen Netzwerken. Eine Dysregulation von SETD1A und verwandten H3K4-Methyltransferase-Signalwegen wurde mit einer veränderten transkriptionellen Homöostase in Verbindung gebracht und wird häufig in Modellen neuropsychiatrischer Erkrankungen sowie des krebsassoziierten epigenetischen Remodelings untersucht.

Set1A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SETD1A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Set1A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SETD1A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Set1A-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SETD1A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.