Plasmide CRISPR d'Activation (h) SerpinB1: sc-402083-ACT

SERPINB1 code l’inhibiteur intracellulaire de sérine protéase SerpinB1, une serpinen de clade B qui freine les protéases dérivées des neutrophiles telles que l’élastase, la cathepsine G et la protéinase 3, afin de limiter les lésions protéolytiques lors de l’inflammation. En modulant l’activité des protéases, SerpinB1 influence la survie des leucocytes, les réponses antimicrobiennes et les programmes de remodelage tissulaire, qui interagissent avec la signalisation de l’immunité innée et les voies de stress inflammatoire. Une expression ou une activité dérégulée de SERPINB1 a été associée à une altération de l’homéostasie inflammatoire et à des dommages induits par les protéases dans des affections touchant les tissus muqueux et pulmonaires, ainsi que dans des contextes plus larges de maladies à médiation immunitaire. Ces caractéristiques font de SERPINB1 un point d’entrée utile pour étudier l’équilibre protéases–antiprotéases, la biologie des neutrophiles et le remodelage associé à l’inflammation.

SerpinB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SERPINB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SerpinB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SERPINB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SERPINB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SerpinB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SERPINB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SerpinB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SerpinB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SERPINB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.