Plasmide CRISPR/Cas9 KO Serglycin (m): sc-422394

Présentation

Srgn code la serglycine, un protéoglycane enrichi dans les cellules hématopoïétiques qui sert d’échafaudage pour l’empaquetage et le stockage de protéases, de chimiokines et d’autres médiateurs bioactifs au sein des granules de sécrétion. Dans les cellules immunitaires de souris, la serglycine contribue à la biogenèse des granules, à l’exocytose régulée et aux interactions avec la matrice extracellulaire grâce à sa protéine centrale modifiée par du sulfate de chondroïtine. Ces fonctions relient Srgn à des voies qui contrôlent les réponses effectrices de l’immunité innée et adaptative, la signalisation inflammatoire et le remodelage dépendant des protéases. Des altérations de la biologie de la serglycine ont été impliquées dans une activation immunitaire dérégulée et dans des processus du microenvironnement associés aux tumeurs, ce qui étaye sa pertinence dans les études mécanistiques de l’inflammation et de la biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Serglycin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Srgn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Srgn, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Srgn à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Serglycin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Srgn pour l'étude de la signalisation de Serglycin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Srgn essentiels à la fonction de Serglycin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Srgn pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Serglycin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Serglycin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Srgn. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Serglycin plasmide HDR (m) et le Serglycin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Srgn pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Srgn définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.