Plásmido Doble Nickase (h) SERCA2: sc-400417-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)SERCA2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SERCA2 (h) y el plásmido de doble nickasa SERCA2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATP2A2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SERCA2 Anticuerpo (F-1): sc-376235
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) SERCA2 | sc-400417-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) SERCA2 | sc-400417-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2A2 codifica la ATPasa de Ca2+ del retículo sarco/endoplásmico humano SERCA2, una ATPasa de tipo P que transporta Ca2+ citosólico hacia el lumen del RE para mantener el almacenamiento de Ca2+ y la homeostasis de la señalización. Al modular la carga de Ca2+ del RE, SERCA2 regula el acoplamiento excitación–contracción, la dinámica de la entrada de Ca2+ operada por depósitos y el control dependiente de Ca2+ del plegamiento de proteínas, la secreción y las vías de supervivencia celular vinculadas a las respuestas de estrés del RE. La alteración de ATP2A2 desestabiliza las oscilaciones intracelulares de Ca2+ y puede modificar redes de señalización posteriores, incluidas las vías de calcineurina/NFAT y de la respuesta a proteínas mal plegadas. La variación en ATP2A2 se asocia con la enfermedad de Darier y se ha implicado en contextos en los que el manejo de Ca2+ del RE influye en la fisiología cardíaca y epitelial, lo que respalda estudios mecanísticos de señalización de Ca2+ y proteostasis.
SERCA2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP2A2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP2A2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP2A2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP2A2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.