Septin 8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422891

Übersicht

Sept8 kodiert Septin 8, ein GTP-bindendes Zytoskelettprotein, das sich zu hetero-oligomeren Septinfilamenten und ringförmigen Strukturen zusammenlagert, die als Gerüst für Membranen dienen und die Schnittstelle zwischen Aktin und Mikrotubuli organisieren. Septin 8 trägt zur Zytokinese, zur Zellpolarität und zum Vesikeltransport bei und hilft, die Signalübertragung zu kompartimentieren, indem es an spezialisierten Membrandomänen Diffusionsbarrieren bildet. In Neuronen werden Septinkomplexe mit Septin 8 mit der Neuritogenese und der synaptischen Organisation in Verbindung gebracht und unterstützen Studien zur Entwicklung und Aufrechterhaltung neuronaler Schaltkreise in Mausmodellen. Eine dysregulierte Dynamik des Septinnetzwerks wurde mit Veränderungen der Zellteilung und des Zytoskelettumbaus assoziiert, wie sie in der Krebs- und neurodegenerativen Forschung beobachtet werden, was Sept8 zu einem nützlichen Ziel für die mechanistische Analyse von Signalwegen macht.

Das Septin 8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sept8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sept8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sept8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Septin 8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sept8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Septin 8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sept8-Exone abzielen, die für die Septin 8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sept8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Septin 8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Septin 8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sept8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Septin 8 HDR-Plasmid (m) und Septin 8 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sept8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sept8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.