Plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 3 (h): sc-406325

Présentation

SEPT3 code la septine 3, une protéine cytosquelettique de la famille des septines, liant le GTP, qui s’assemble en filaments hétéro-oligomériques et en structures en anneau afin d’organiser des domaines membranaires. La septine 3 contribue à des processus associés à l’actine et aux microtubules, notamment le trafic vésiculaire, l’extension des neurites, ainsi que le contrôle spatial de la cytokinèse et de la polarité cellulaire, grâce à des fonctions d’échafaudage et de barrière à la diffusion. Dans le système nerveux, l’expression de SEPT3 est enrichie dans les neurones et a été liée à la régulation de l’architecture synaptique et de la dynamique des vésicules, l’associant à des voies impliquées dans la différenciation neuronale et la transmission synaptique. Une organisation dérégulée du réseau de septines et des altérations associées à SEPT3 ont été rapportées dans des études sur la neurodégénérescence et la biologie tumorale, ce qui soutient son intérêt en tant que nœud mécanistique pour la recherche sur le remodelage du cytosquelette et des membranes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SEPT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SEPT3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SEPT3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Septin 3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SEPT3 pour l'étude de la signalisation de Septin 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SEPT3 essentiels à la fonction de Septin 3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SEPT3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Septin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Septin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SEPT3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Septin 3 plasmide HDR (h) et le Septin 3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SEPT3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SEPT3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.