Septin 3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406325

Visão geral

O SEPT3 codifica a septina 3, uma proteína citosquelética ligante de GTP da família das septinas que se monta em filamentos hetero-oligoméricos e em estruturas semelhantes a anéis para organizar domínios de membrana. A septina 3 contribui para processos associados à actina e aos microtúbulos, incluindo tráfego vesicular, crescimento de neuritos e controlo espacial da citocinese e da polaridade celular, através de funções de andaime e de barreira de difusão. No sistema nervoso, a expressão de SEPT3 é enriquecida em neurónios e tem sido associada à regulação da arquitetura sináptica e da dinâmica de vesículas, ligando-a a vias que governam a diferenciação neuronal e a transmissão sináptica. A desregulação da organização da rede de septinas e alterações associadas ao SEPT3 foram relatadas em estudos de neurodegeneração e de biologia tumoral, sustentando a sua utilidade como um nó mecanístico na investigação de remodelação do citoesqueleto e da membrana.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Septin 3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SEPT3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SEPT3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SEPT3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Septin 3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SEPT3 para a investigação da sinalização de Septin 3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SEPT3 críticos para a função Septin 3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SEPT3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Septin 3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Septin 3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SEPT3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Septin 3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Septin 3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SEPT3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SEPT3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.