Septin 2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421849

Descripción general

Mouse Sept2 encodes la septina 2, una proteína citosquelética central de unión a GTP que se ensambla en filamentos de septinas hetero-oligoméricos y estructuras en forma de anillo para organizar la arquitectura celular. La septina 2 coordina la citocinesis, la remodelación de membranas y el tráfico vesicular, y se interrelaciona con las redes de actina y microtúbulos para sostener el crecimiento polarizado y la compartimentalización intracelular. El andamiaje dependiente de Sept2 contribuye a procesos como la formación del cuerpo medio, el crecimiento de neuritas y la organización de la barrera epitelial, vinculando la dinámica de las septinas con vías que gobiernan la división celular y la morfogénesis. La desregulación de la organización de las septinas se ha asociado con mitosis aberrante y señalización citosquelética alterada, lo que convierte a Sept2 en un nodo útil para estudiar mecanismos relevantes para la biología tumoral y fenotipos del neurodesarrollo en modelos experimentales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Septin 2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sept2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sept2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sept2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Septin 2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sept2 para la investigación de la señalización de Septin 2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sept2 críticos para la función de Septin 2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sept2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Septin 2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Septin 2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sept2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Septin 2 (m) y el plásmido HDR Septin 2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sept2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sept2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.