Plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 14 (h): sc-406949

Présentation

SEPT14 code la septine 14, un membre de la famille des septines, des protéines cytosquelettiques liant le GTP qui s’assemblent en filaments hétéro-oligomériques et en structures annulaires d’ordre supérieur. La septine 14 contribue à l’organisation de l’interface actine–microtubules, au remodelage membranaire et à l’établissement de barrières de diffusion qui soutiennent la cytocinèse, la polarité cellulaire et le trafic vésiculaire. L’échafaudage dépendant des septines coordonne également la signalisation et la compartimentation des protéines au niveau du cortex, reliant la dynamique du cytosquelette à la progression du cycle cellulaire. Une expression dérégulée des septines ou une organisation anormale de leurs filaments a été associée à des altérations de la prolifération et de l’architecture cellulaire dans des contextes pertinents pour la maladie, ce qui justifie l’étude de SEPT14 dans les mécanismes de dysfonctionnement du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 14 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SEPT14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SEPT14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SEPT14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Septin 14.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SEPT14 pour l'étude de la signalisation de Septin 14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SEPT14 essentiels à la fonction de Septin 14
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SEPT14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Septin 14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Septin 14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SEPT14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Septin 14 plasmide HDR (h) et le Septin 14 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SEPT14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SEPT14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.