Plasmide CRISPR/Cas9 KO SENP2 (m): sc-429217

Présentation

Senp2 code la protéase spécifique de la sentrine/SUMO 2 (SENP2), une enzyme de déSUMOylation qui inverse la conjugaison au SUMO afin de réguler la stabilité des protéines, leur localisation subcellulaire et les programmes transcriptionnels. L’activité de SENP2 module le contrôle SUMO-dépendant de la progression du cycle cellulaire, des réponses aux dommages de l’ADN et du transport nucléaire, en influençant des nœuds de signalisation tels que NF-κB et les voies de stress associées à p53. Dans les systèmes murins, Senp2 a été associé à des phénotypes développementaux et cardiovasculaires et est fréquemment étudié pour son impact sur l’inflammation, la régulation métabolique et l’homéostasie cellulaire. Une dérégulation de la fonction des protéases SUMO peut perturber la protéostasie et des processus liés à la chromatine, pertinents pour la modélisation des maladies et l’étude des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SENP2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Senp2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Senp2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Senp2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SENP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Senp2 pour l'étude de la signalisation de SENP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Senp2 essentiels à la fonction de SENP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Senp2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SENP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SENP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Senp2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SENP2 plasmide HDR (m) et le SENP2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Senp2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Senp2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.