Plasmide CRISPR d'Activation (h) SENP2: sc-402148-ACT

Le gène humain **SENP2** code une protéase spécifique de la SUMO qui inverse la SUMOylation en maturant les précurseurs de SUMO et en déconjuguant la SUMO des protéines substrats, modulant ainsi la stabilité, la localisation et l’activité des protéines. Par le contrôle dynamique de la signalisation dépendante de la SUMO, SENP2 influence la régulation transcriptionnelle, les réponses aux dommages de l’ADN, la progression du cycle cellulaire et des voies d’adaptation au stress, y compris des interactions avec la protéostasie médiée par l’ubiquitine. Une homéostasie de la SUMO altérée et une activité de SENP2 dérégulée ont été associées à des modifications de la signalisation inflammatoire, du maintien du génome et de programmes oncogéniques, soulignant sa pertinence dans les études de biologie du cancer et des phénotypes cellulaires apparentés. SENP2 est également utilisée comme nœud pour interroger le flux de la voie SUMO et la régulation spécifique des substrats dans divers modèles de cellules humaines.

SENP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SENP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SENP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SENP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SENP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SENP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SENP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SENP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SENP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SENP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.