Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA5B (h): sc-406519

Présentation

SEMA5B code la sémaphorine‑5B, un signal de guidage transmembranaire qui régule la communication cellule‑cellule, le remodelage du cytosquelette et la migration directionnelle via des interactions avec les récepteurs plexines et les protéoglycanes à héparane sulfate. La signalisation de SEMA5B contribue au guidage axonal et à l’organisation des synapses dans le système nerveux, et peut influencer les programmes d’adhérence et de motilité par des voies dépendantes des GTPases de la famille Rho. Des altérations de la signalisation des sémaphorines ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ainsi qu’à des rôles dépendants du contexte dans l’invasion tumorale et la modulation du microenvironnement immunitaire. Par conséquent, SEMA5B est largement étudié pour comprendre les mécanismes de connectivité neuronale, de plasticité et la biologie des maladies liées à la migration.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA5B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SEMA5B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SEMA5B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SEMA5B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA5B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SEMA5B pour l'étude de la signalisation de SEMA5B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SEMA5B essentiels à la fonction de SEMA5B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SEMA5B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEMA5B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SEMA5B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SEMA5B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA5B plasmide HDR (h) et le SEMA5B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SEMA5B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SEMA5B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.