SEMA5A Double Nickase Plasmid (m): sc-422885-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SEMA5A Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SEMA5A Double-Nickase-Plasmid (m) und SEMA5A Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sema5a abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SEMA5A Double Nickase Plasmid (m) | sc-422885-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SEMA5A Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422885-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen Sema5a kodiert den transmembranen Leitsignalgeber SEMA5A, ein Mitglied der Semaphorin-Familie, der die Axonnavigation, die dendritische Musterbildung und die Zellmotilität über Rezeptorinteraktionen moduliert, welche das Zytoskelett-Remodeling und die Adhäsionsdynamik beeinflussen. Die SEMA5A-Signalgebung ist mit Signalwegen verknüpft, die das Wachstumskegel-Tracking sowie Zell–Zell- und Zell–ECM-Interaktionen steuern, und trägt so zur Bildung neuronaler Schaltkreise und zur Gewebeorganisation bei. Eine veränderte Expression oder Funktion von Sema5a wurde mit neuroentwicklungsbezogenen und neuroverhaltensbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht; zudem wird eine fehlregulierte Semaphorin-Signalgebung auch im Kontext aberranter Migrations- und Invasionsprogramme untersucht. Diese Eigenschaften machen Sema5a zu einem nützlichen Ziel, um Mechanismen der Entwicklungsverschaltung, der synaptischen Konnektivität und der semaphorinvermittelten Regulation zellulärer Bewegung zu analysieren.
SEMA5A Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sema5a-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sema5a abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sema5a-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sema5a-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.