Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4C (m): sc-422882

Présentation

Sema4c code la sémaphorine-4C (SEMA4C), une molécule transmembranaire de guidage qui transmet des signaux via des récepteurs de type plexine afin de réguler la communication intercellulaire, la migration directionnelle et le remodelage du cytosquelette. Dans les tissus murins, SEMA4C contribue à des événements de signalisation dépendants du contact qui façonnent l’organisation neuronale et influencent les interactions des cellules immunitaires, reliant les voies des sémaphorines à des processus développementaux et inflammatoires. Les effets en aval convergent fréquemment vers la régulation des GTPases de la famille Rho et des programmes associés aux MAPK, qui coordonnent la dynamique d’adhérence et la motilité. Des altérations de la signalisation sémaphorine–plexine ont été associées à un remodelage tissulaire dérégulé et à des modifications du microenvironnement immunitaire, ce qui justifie son étude dans des modèles pertinents pour les maladies, sans pour autant présumer d’effets thérapeutiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sema4c dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sema4c, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sema4c à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA4C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sema4c pour l'étude de la signalisation de SEMA4C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sema4c essentiels à la fonction de SEMA4C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sema4c pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEMA4C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEMA4C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sema4c. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA4C plasmide HDR (m) et le SEMA4C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sema4c pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sema4c définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.