Plasmide CRISPR/Cas9 KO SELB (h): sc-409155

Présentation

EEFSEC code le facteur d’élongation de la traduction spécifique de la sélénocystéine SELB (eEFSec), un composant central de la machinerie spécialisée qui insère la sélénocystéine sur les codons UGA lors de la synthèse des sélénoprotéines humaines. SELB coopère avec des facteurs se liant à l’élément SECIS et avec le Sec-tRNA pour soutenir le recodage traductionnel, influençant ainsi l’homéostasie rédox cellulaire, les réponses au stress oxydant et le contrôle qualité des protéines via la production de sélénzymes. En régulant l’activité des voies antioxydantes et thiol-rédox, l’activité d’EEFSEC peut moduler la susceptibilité aux dommages oxydatifs et la signalisation adaptative au stress. Une dérégulation de la biosynthèse des sélénoprotéines a été associée à des modifications du tonus inflammatoire et à des phénotypes métaboliques, ce qui fait d’EEFSEC une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie rédox liée aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SELB (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EEFSEC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EEFSEC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EEFSEC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SELB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EEFSEC pour l'étude de la signalisation de SELB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EEFSEC essentiels à la fonction de SELB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EEFSEC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SELB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SELB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EEFSEC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SELB plasmide HDR (h) et le SELB (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EEFSEC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EEFSEC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.