Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sel-1L: sc-403861-ACT

SEL1L code Sel-1L, un composant central de la machinerie de dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD), qui s’associe à HRD1 pour reconnaître les protéines sécrétées et membranaires mal repliées, les rétrotransloquer et favoriser leur élimination par le protéasome de manière dépendante de l’ubiquitine. Par ce rôle, il soutient la protéostasie du RE, module la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées et influence la stabilité de divers substrats impliqués dans la différenciation et l’adaptation au stress. L’activité de SEL1L recoupe des voies contrôlant le contrôle qualité du RE, les complexes de ligases ubiquitine et l’homéostasie de la voie sécrétoire, des processus fréquemment perturbés dans les affections caractérisées par un stress chronique du RE. Une capacité ERAD dérégulée et une expression altérée de SEL1L ont été étudiées dans des travaux sur la neurodégénérescence, les dysfonctionnements métaboliques et la biologie tumorale, comme mécanismes reliant le stress protéotoxique aux décisions de destinée cellulaire.

Sel-1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SEL1L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sel-1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SEL1L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SEL1L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sel-1L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SEL1L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sel-1L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sel-1L dans les cellules tumorales présentant une expression de SEL1L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.