Seipin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420617

Übersicht

Das Mausgen *Bscl2* kodiert Seipin, ein Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums, das die Adipogenese, die Biogenese von Lipidtröpfchen und die Speicherung neutraler Lipide koordiniert, indem es den Fluss von Triglyceriden und Phospholipiden an ER–Lipidtröpfchen-Kontaktstellen reguliert. Seipin trägt zu einer korrekten Morphologie der Lipidtröpfchen bei und begrenzt die abnorme Anreicherung von Lipidzwischenprodukten, die die ER-Homöostase und die Membranzusammensetzung stören können. Eine Störung der Seipin-Funktion ist mit Lipodystrophie-Phänotypen und veränderter metabolischer Signalübertragung verknüpft und wurde in bestimmten genetischen Kontexten auch mit neurodegenerativen Prozessen in Verbindung gebracht. *Bscl2* dient daher als nützlicher Knotenpunkt zur Untersuchung von Signalwegen der Lipidhomöostase, Organellen-Kontaktstellen und zelltypspezifischer metabolischer Vulnerabilität in Mausmodellen.

Das Seipin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Bscl2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Bscl2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Bscl2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Seipin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Bscl2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Seipin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Bscl2-Exone abzielen, die für die Seipin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Bscl2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Seipin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Seipin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Bscl2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Seipin HDR-Plasmid (m) und Seipin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Bscl2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Bscl2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.