Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec61α1 (m): sc-424716

Présentation

Sec61a1 code pour Sec61α1, la sous-unité centrale formant le pore du translocon Sec61 dans la membrane du réticulum endoplasmique (RE), qui assure l’import co‑traductionnel et post‑traductionnel des protéines sécrétées et des protéines membranaires. En couplant l’ancrage du ribosome à la translocation et à l’intégration du peptide, Sec61α1 soutient la biogenèse des protéines, le contrôle qualité du RE et les voies de protéostasie, notamment la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et la dégradation associée au RE (ERAD). Une perturbation de la fonction du canal SEC61 a été associée à des défauts d’homéostasie de la voie sécrétoire et des réponses cellulaires au stress, des processus fréquemment impliqués dans des modèles d’inflammation, de dysfonctionnement métabolique et de neurodégénérescence. Dans les systèmes murins, Sec61a1 constitue un point d’entrée pertinent pour étudier comment la capacité d’import du RE façonne la signalisation, la différenciation et la survie en contexte de stress protéotoxique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec61α1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sec61a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sec61a1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sec61a1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sec61α1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sec61a1 pour l'étude de la signalisation de Sec61α1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sec61a1 essentiels à la fonction de Sec61α1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sec61a1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sec61α1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Sec61α1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sec61a1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sec61α1 plasmide HDR (m) et le Sec61α1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sec61a1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sec61a1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.