SEC24A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-429522

Übersicht

Sec24a kodiert SEC24A, eine zentrale Komponente des COPII-Mantels, der Fracht auswählt und den anterograden Transport vom endoplasmatischen Retikulum zum Golgi-Apparat antreibt. Durch die Zusammenarbeit mit SEC23 und die Interaktion mit Frachtadaptern trägt SEC24A zur Regulation des sekretorischen Transports, der ER-Proteostase und der Membranhomöostase bei, die wiederum den Lipidumsatz und die Zusammensetzung von Zelloberflächenrezeptoren beeinflussen. Störungen des COPII-abhängigen Exports können ER-Stressantworten auslösen und die Abgabe von extrazellulärer Matrix sowie von Signalmolekülen verändern, wodurch die Funktion von SEC24A mit Signalwegen verknüpft ist, die Stoffwechsel und Gewebehomöostase steuern. Bei Mäusen wurde Sec24a genutzt, um zu untersuchen, wie selektive Frachtverpackung die systemische Lipid- und Lipoproteinbiologie sowie weitere Phänotypen des sekretorischen Weges beeinflusst.

Das SEC24A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sec24a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sec24a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sec24a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SEC24A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sec24a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SEC24A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sec24a-Exone abzielen, die für die SEC24A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sec24a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SEC24A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SEC24A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sec24a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SEC24A HDR-Plasmid (m) und SEC24A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sec24a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sec24a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.