Plasmide Double Nickase (m) SEC16A: sc-432718-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SEC16A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SEC16A Double Nickase (m) et le plasmide SEC16A Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Sec16a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SEC16A | sc-432718-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) SEC16A | sc-432718-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sec16a code SEC16A, une protéine d’échafaudage essentielle des sites de sortie du réticulum endoplasmique, qui organise l’assemblage du manteau COPII afin d’initier le transport du RE vers l’appareil de Golgi. En coordonnant le recrutement et la dynamique des complexes SEC23/SEC24 et SEC13/SEC31, SEC16A régule le flux de la voie sécrétoire et la biogenèse des transporteurs qui soutiennent le trafic membranaire, l’homéostasie des organites et la protéostasie. Des altérations du trafic sécrétoire précoce peuvent perturber le métabolisme lipidique, la sécrétion de la matrice extracellulaire et la présentation des récepteurs, des processus pertinents pour l’adaptation au stress et les transitions d’état cellulaire. SEC16A est donc étudiée dans des voies reliant l’organisation du RE à l’autophagie, à la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et à la régulation, dépendante du trafic, de la croissance et de la différenciation cellulaires dans des modèles murins.
SEC16A Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sec16a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sec16a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sec16a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sec16a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.