Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec15A (h): sc-405860

Présentation

EXOC6 code Sec15A, un composant central du complexe exocyste octamérique, qui assure l’arrimage des vésicules de sécrétion à la membrane plasmique, de manière spatialement régulée, avant leur fusion dépendante des SNARE. Sec15A contribue à coupler la signalisation des GTPases des familles RAB et RHO à l’exocytose polarisée, soutenant l’acheminement des protéines membranaires, la migration cellulaire, la cytokinèse et la polarité épithéliale. Par son rôle dans le trafic vésiculaire et le remodelage membranaire, EXOC6 est pertinent pour des voies qui façonnent les jonctions cellule–cellule et le recyclage des récepteurs, des processus fréquemment perturbés dans des phénotypes cellulaires prolifératifs et invasifs. La dérégulation de sous-unités de l’exocyste, dont Sec15A, a été associée dans la littérature à des programmes de sécrétion et des sorties de signalisation altérés dans des contextes liés au cancer et au neurodéveloppement, faisant d’EXOC6 une cible utile pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec15A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EXOC6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EXOC6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EXOC6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sec15A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EXOC6 pour l'étude de la signalisation de Sec15A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EXOC6 essentiels à la fonction de Sec15A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EXOC6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sec15A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Sec15A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EXOC6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sec15A plasmide HDR (h) et le Sec15A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EXOC6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EXOC6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.