Plasmide CRISPR/Cas9 KO Scrib (m): sc-430616
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Scrib Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Scrib, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Scrib Antibody (D-2): sc-374139
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Scrib (m) | sc-430616 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Scrib code Scribble, une protéine d’échafaudage de polarité conservée qui se localise aux jonctions cellule–cellule et coordonne la polarité apico-basale, l’architecture épithéliale et la migration cellulaire dirigée. Dans les modèles murins, Scribble intègre les signaux issus des réseaux de polarité avec des régulateurs des jonctions et du cytosquelette, influençant des processus tels que la polarité planaire des cellules, le trafic vésiculaire et la morphogenèse tissulaire. La perturbation du contrôle de la polarité dépendant de SCRIB est associée à une prolifération et une invasivité altérées, reliant cette voie à des anomalies du développement et à des phénotypes pertinents pour le cancer. Scrib est donc largement étudié dans des contextes où l’intégrité des jonctions, la migration et la signalisation dépendante de la polarité façonnent l’organisation des tissus et les mécanismes de la maladie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Scrib (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Scrib dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Scrib, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Scrib à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Scrib.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Scrib pour l'étude de la signalisation de Scrib, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Scrib essentiels à la fonction de Scrib
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Scrib pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Scrib plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Scrib plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Scrib. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Scrib plasmide HDR (m) et le Scrib (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Scrib pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Scrib définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.