Plasmide CRISPR/Cas9 KO SCP-1 (m): sc-423231

Présentation

Sycp1 code pour la protéine 1 du complexe synaptonémal (SCP-1), un composant structural spécifique de la méiose du complexe synaptonémal, qui s’assemble le long des chromosomes homologues pendant la prophase I. SCP-1 soutient la synapsis chromosomique, favorise la formation de crossing-over et contribue à coordonner les événements de recombinaison et de réparation de l’ADN nécessaires à une ségrégation fidèle dans les spermatocytes et les ovocytes. La perturbation de la synapsis dépendante de SYCP1 est associée à un arrêt méiotique et à la formation de gamètes aneuploïdes, ce qui en fait une cible pertinente pour les études sur l’infertilité et le développement des cellules germinales. Chez la souris, Sycp1 est largement utilisé comme marqueur et comme nœud mécanistique pour disséquer la progression méiotique, la signalisation des points de contrôle et l’intégrité des voies de recombinaison.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SCP-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sycp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sycp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sycp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SCP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sycp1 pour l'étude de la signalisation de SCP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sycp1 essentiels à la fonction de SCP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sycp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SCP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SCP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sycp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SCP-1 plasmide HDR (m) et le SCP-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sycp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sycp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.