Plasmide CRISPR d'Activation (h) SCML2: sc-405003-ACT

SCML2 (sex comb on midleg-like 2) code une protéine du groupe Polycomb qui contribue au silençage épigénétique des gènes via des complexes associés à la chromatine et une régulation dépendante des marques d’histones. Elle est liée à des programmes de répression transcriptionnelle qui façonnent l’identité cellulaire, la différenciation, ainsi que des processus de développement de la lignée germinale et du système nerveux, en accord avec ses fonctions de lecteur de chromatine et ses interactions avec la machinerie régulatrice Polycomb. En modulant l’accessibilité au niveau de loci développementaux, SCML2 influence les états transcriptionnels à l’échelle du génome et peut s’articuler avec des voies contrôlant la progression du cycle cellulaire et l’engagement de lignée. Une expression dérégulée de SCML2 ou une activité Polycomb altérée a été associée à des états épigénétiques aberrants observés dans le cancer et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du contrôle transcriptionnel et du remodelage de la chromatine associé aux maladies.

SCML2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SCML2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SCML2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SCML2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SCML2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SCML2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SCML2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SCML2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SCML2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SCML2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.