Plasmide CRISPR d'Activation (m) Scleraxis: sc-422833-ACT

Le gène Scx de la souris code la scléraxine, un facteur de transcription à hélice-boucle-hélice basique qui agit comme régulateur de lignée des progéniteurs des tendons et des ligaments, et comme moteur clé des programmes géniques de la matrice extracellulaire. La scléraxine coordonne des réseaux transcriptionnels contrôlant la différenciation des ténocytes, la fibrillogenèse du collagène et l’organisation du cytosquelette en réponse à des signaux développementaux et à la charge biomécanique, en interaction avec des voies telles que TGF-β/SMAD, FGF et la signalisation de mécanotransduction. Une expression ou une activité de SCX altérée est associée à un remodelage dysrégulé du tissu conjonctif, à une maturation tendineuse compromise et à un dépôt matriciel de type fibrotique, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude du développement musculosquelettique et de la biologie de la réparation des tissus mous.

Scleraxis Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Scx sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Scleraxis Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Scx dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Scx, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Scleraxis. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Scx natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Scleraxis au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Scleraxis dans les cellules tumorales présentant une expression de Scx silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.