Plasmide CRISPR d'Activation (m) SCG10: sc-422814-ACT

Stmn2 code pour SCG10, une phosphoprotéine de la famille des stathmines enrichie dans les neurones, qui régule la dynamique des microtubules en se liant à la tubuline et en favorisant la déstabilisation des microtubules lors de l’initiation des neurites, de la croissance axonale et du remodelage du cône de croissance dans des cellules de souris. SCG10 est transportée vers les neurites et les cônes de croissance, reliant le remodelage du cytosquelette au trafic intracellulaire et à la plasticité neuronale dépendante de l’activité. En contrôlant le renouvellement des microtubules, SCG10 influence des processus tels que la régénération axonale, la connectivité synaptique et les programmes de différenciation neuronale. Une régulation altérée de STMN2/SCG10 est fréquemment étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence et des axonopathies, notamment au sein de voies impliquées dans la vulnérabilité des motoneurones et le maintien axonal déficient.

SCG10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Stmn2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SCG10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Stmn2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Stmn2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SCG10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Stmn2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SCG10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SCG10 dans les cellules tumorales présentant une expression de Stmn2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.