Plasmide CRISPR d'Activation (m) SCD1: sc-422809-ACT

Le gène murin *Scd1* code la stéaroyl‑CoA désaturase 1 (SCD1), une enzyme microsomale qui introduit une double liaison Δ9 dans des acyl‑CoA d’acides gras saturés afin de générer des acides gras mono‑insaturés tels que l’oléate et le palmitoléate. En contrôlant l’équilibre lipidique saturés/insaturés, SCD1 influence la fluidité membranaire, la synthèse des triglycérides et des esters de cholestérol, la formation des gouttelettes lipidiques, ainsi que la signalisation via des programmes lipogéniques, notamment les voies régulées par SREBP1. L’activité de *Scd1* affecte l’homéostasie métabolique et les réponses au stress cellulaire, reliant une capacité de désaturation altérée à l’obésité, à la résistance à l’insuline, à la stéatose hépatique, à l’inflammation, et à des effets dépendants du contexte sur le métabolisme lipidique des cellules cancéreuses. Dans les systèmes murins, *Scd1* est fréquemment utilisé pour étudier le remodelage lipidique, le stress du réticulum endoplasmique (RE) et les réseaux transcriptionnels sensibles aux nutriments.

SCD1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Scd1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SCD1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Scd1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Scd1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SCD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Scd1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SCD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SCD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Scd1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.