Plasmide CRISPR/Cas9 KO SCCA1/2 (h): sc-418018

Présentation

SERPINB4 code pour l’antigène du carcinome épidermoïde 1/2 (SCCA1/2), un inhibiteur de protéases à sérine de la clade B qui module la protéolyse intracellulaire en inhibant certaines cathepsines et des protéases apparentées. En limitant le renouvellement des protéines entraîné par les protéases ainsi que l’activité des protéases inflammatoires, SCCA1/2 influence la différenciation épithéliale, les réponses au stress liées à la fonction barrière et les programmes de signalisation associés aux cytokines. Une expression altérée de SERPINB4 a été rapportée dans les épithéliums malpighiens et les microenvironnements inflammatoires, où elle est utilisée comme biomarqueur dans des études de biologie tumorale et d’inflammation chronique. L’étude fonctionnelle de SERPINB4 appuie des travaux mécanistiques sur l’équilibre protéase–antiprotéase, la survie cellulaire en condition de stress et la communication croisée entre les voies épithéliales et immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SCCA1/2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SERPINB4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SERPINB4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SERPINB4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SCCA1/2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SERPINB4 pour l'étude de la signalisation de SCCA1/2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SERPINB4 essentiels à la fonction de SCCA1/2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SERPINB4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SCCA1/2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SCCA1/2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SERPINB4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SCCA1/2 plasmide HDR (h) et le SCCA1/2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SERPINB4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SERPINB4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.