Particules Lentivirales d'Activation (m) SAV1: sc-425662-LAC

Sav1 code la protéine 1 de la famille Salvador contenant un domaine WW (SAV1), un composant d’échafaudage de la voie Hippo qui coordonne la signalisation des kinases MST1/2–LATS1/2 afin de limiter la transcription dépendante de YAP/TAZ. Dans les cellules de souris, SAV1 contribue au contrôle de la prolifération, de l’apoptose et de la croissance tissulaire en favorisant la rétention cytoplasmique et la dégradation de YAP/TAZ, dépendantes de leur phosphorylation. Par ces fonctions, Sav1 soutient l’inhibition de contact et l’homéostasie de la taille des organes, et interagit avec la dynamique du cytosquelette ainsi qu’avec la signalisation des jonctions, qui influencent les décisions de destinée cellulaire. La dérégulation de la voie Hippo et l’altération de l’activité de SAV1 sont largement pertinentes dans des modèles d’hyperprolifération, de transition épithélio-mésenchymateuse et de biologie des suppresseurs de tumeurs chez les mammifères.

Les particules d'activation lentivirales SAV1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Sav1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SAV1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Sav1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SAV1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Sav1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.