Plasmide CRISPR/Cas9 KO SATB2 (m): sc-431818

Présentation

Satb2 code pour SATB2, un régulateur transcriptionnel associé à la matrice nucléaire qui se lie à des éléments d’ADN riches en AT et organise la structure de la chromatine à un niveau supérieur afin de coordonner des programmes d’expression génique spécifiques de lignée dans les cellules de souris. SATB2 influence des réseaux transcriptionnels du développement et la régulation épigénétique, affectant des processus tels que la différenciation, la mise en place des tissus et la maturation neuronale, via la modulation de l’accessibilité de la chromatine et des interactions à longue distance entre enhancers et promoteurs. Dans le système immunitaire et d’autres tissus, les protéines de la famille SATB intègrent des réponses transcriptionnelles dépendantes des signaux en façonnant l’architecture du génome et en favorisant le recrutement de co‑régulateurs. Une activité de SATB2 dérégulée est associée à des états de différenciation altérés et à des signatures d’expression génique aberrantes, pertinentes pour des phénotypes développementaux et des remaniements transcriptionnels liés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SATB2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Satb2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Satb2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Satb2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SATB2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Satb2 pour l'étude de la signalisation de SATB2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Satb2 essentiels à la fonction de SATB2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Satb2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SATB2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SATB2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Satb2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SATB2 plasmide HDR (m) et le SATB2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Satb2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Satb2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.