Plasmide CRISPR/Cas9 KO SARM (h): sc-403427

Présentation

La protéine 1 contenant un motif stérile alpha et TIR (SARM1 ; SARM) est un adaptateur de l’immunité innée enrichi dans les axones et une NADase, qui agit comme l’exécuteur central de la dégénérescence axonale programmée. À la suite d’une lésion neuronale ou d’un stress métabolique, l’activation de SARM1 favorise une déplétion rapide en NAD+, une défaillance énergétique et la désorganisation du cytosquelette, en s’intégrant à des voies qui régulent l’homéostasie NMN/NAD, la dysfonction mitochondriale, l’influx calcique et la signalisation MAPK. Une activité dérégulée de SARM1 a été impliquée dans des contextes neurodégénératifs et neuro-inflammatoires, notamment les neuropathies périphériques et les troubles liés aux axonopathies, où l’entretien des axones et les réponses au stress sont compromis. En tant que nœud de signalisation reliant la biologie du domaine TIR à l’effondrement métabolique, SARM1 est largement étudiée pour ses rôles dans l’intégrité axonale, la survie neuronale et la signalisation associée à l’immunité innée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SARM (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SARM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SARM1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SARM1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SARM.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SARM1 pour l'étude de la signalisation de SARM, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SARM1 essentiels à la fonction de SARM
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SARM1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SARM plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SARM plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SARM1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SARM plasmide HDR (h) et le SARM (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SARM1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SARM1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.