Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sarcospan (m): sc-421332

Présentation

Sspn code la sarcospane, une protéine membranaire tétraspan qui fait partie du complexe dystrophine–glycoprotéines et contribue à l’organisation du sarcolemme en stabilisant des assemblages de récepteurs se liant à la laminine. Dans le muscle squelettique et le muscle cardiaque, la sarcospane soutient l’intégrité membranaire pendant la contraction et participe à la mécanotransduction en influençant la distribution et la fonction des sarcoglycanes et des intégrines associées. Des altérations de l’assemblage du complexe dépendant de la sarcospane ont été associées à une fragilité musculaire et à une régénération déficiente, faisant de Sspn un point d’entrée utile pour étudier des voies pertinentes aux phénotypes de dystrophie musculaire. Comme la sarcospane influence aussi les interactions avec la matrice extracellulaire et l’organisation des microdomaines membranaires, elle est fréquemment étudiée dans des modèles de lésions des myofibres, d’inflammation et de remodelage.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sarcospan (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sspn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sspn, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sspn à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sarcospan.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sspn pour l'étude de la signalisation de Sarcospan, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sspn essentiels à la fonction de Sarcospan
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sspn pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sarcospan plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Sarcospan plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sspn. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sarcospan plasmide HDR (m) et le Sarcospan (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sspn pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sspn définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.