Plasmide CRISPR d'Activation (m) Sarcospan: sc-421332-ACT

Le gène murin **Sspn** code la sarcospane, une petite protéine membranaire de type tétraspanine qui s’associe au complexe dystrophine–glycoprotéines et aux sous-complexes de sarcoglycanes apparentés afin de soutenir la stabilité du sarcolemme et une transmission efficace de la force dans le muscle strié. La sarcospane contribue à l’organisation de la membrane, au trafic des protéines et à des événements de signalisation liés à l’adhésion à la matrice extracellulaire et au couplage avec le cytosquelette. Les altérations de la fonction ou de l’expression de **SSPN** sont étudiées dans le contexte des voies associées aux dystrophies musculaires, de la fragilité des fibres musculaires et des réponses de remodelage dans les muscles squelettique et cardiaque. En tant que modulateur de l’assemblage des complexes membranaires, **Sspn** est pertinent pour l’étude de la dégénérescence et de la régénération musculaires, ainsi que de la mécanotransduction, dans des modèles murins.

Sarcospan Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sspn sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sarcospan Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sspn dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sspn, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sarcospan. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sspn natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sarcospan au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sarcospan dans les cellules tumorales présentant une expression de Sspn silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.