Plasmide Double Nickase (h) Sar1a: sc-404190-NIC

SAR1A code Sar1a, une petite GTPase du COPII qui initie l’assemblage du manteau aux sites de sortie du réticulum endoplasmique afin de permettre le transport du RE vers l’appareil de Golgi. En alternant entre les états liés au GDP et au GTP, Sar1a recrute Sec23/24 et favorise le bourgeonnement des vésicules, reliant le trafic de la voie sécrétoire à l’homéostasie membranaire et à la protéostase. La dynamique du COPII dépendante de SAR1A influence la sécrétion de composants de la matrice extracellulaire et de lipoprotéines, et les perturbations du fonctionnement de la voie sécrétoire précoce sont pertinentes pour les réponses au stress cellulaire ainsi que pour des pathologies impliquant un trafic protéique défectueux. Dans des modèles cellulaires humains, Sar1a est fréquemment étudiée pour ses rôles dans la régulation de la voie sécrétoire, l’organisation des organites et l’impact en aval sur la signalisation et le métabolisme.

Sar1a Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SAR1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SAR1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SAR1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SAR1A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.