Plasmide CRISPR/Cas9 KO SAPS1 (h): sc-406315

Présentation

PPP6R1 code SAPS1, une sous-unité régulatrice de la protéine phosphatase 6 (PP6) qui aide à orienter l’activité catalytique vers des substrats spécifiques et des compartiments subcellulaires particuliers. Via l’assemblage du complexe PP6, SAPS1 contribue à des programmes de déphosphorylation sur sérine/thréonine qui influencent la progression du cycle cellulaire, l’organisation du fuseau mitotique et la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN. La phosphorégulation liée à PP6 recoupe des voies activées par le stress et le contrôle des checkpoints, façonnant la stabilité du génome et la capacité proliférative. Des sous-unités régulatrices de PP6 dérégulées ont été impliquées dans des perturbations de l’homéostasie de phosphorylation observées dans de multiples contextes pathologiques, notamment le remodelage de la signalisation associé aux cancers.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SAPS1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PPP6R1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PPP6R1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PPP6R1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SAPS1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PPP6R1 pour l'étude de la signalisation de SAPS1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PPP6R1 essentiels à la fonction de SAPS1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PPP6R1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SAPS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SAPS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PPP6R1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SAPS1 plasmide HDR (h) et le SAPS1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PPP6R1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PPP6R1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.