Plasmide CRISPR d'Activation (h) SAPK4: sc-400423-ACT

MAPK13 code la protéine kinase 4 activée par le stress (SAPK4/p38δ), un membre de la famille des MAPK p38 qui intègre les cytokines inflammatoires, le stress oxydatif et les signaux environnementaux en réponses transcriptionnelles et post-traductionnelles dépendantes du contexte. SAPK4 participe à des réseaux de signalisation MAPK qui régulent la différenciation cellulaire, l’apoptose, la dynamique du cytosquelette et les programmes effecteurs de l’immunité innée via la phosphorylation de substrats en aval et la modulation de l’activité de facteurs de transcription. Une dérégulation de la signalisation MAPK13 a été rapportée dans de multiples contextes pertinents pour la maladie, notamment les troubles inflammatoires et des phénotypes oncogéniques, où l’activité de p38δ peut influencer la biologie épithéliale et les interactions immuno–stromales. En tant que nœud des voies de réponse au stress, SAPK4 est fréquemment étudiée pour disséquer les interactions croisées de signalisation spécifiques aux stimuli et les programmes d’expression génique en aval.

SAPK4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAPK13 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SAPK4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAPK13 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAPK13, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SAPK4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAPK13 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SAPK4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SAPK4 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAPK13 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.