Plasmide CRISPR/Cas9 KO SAP 97 (h): sc-400865

Présentation

DLG1 code la protéine synaptique associée SAP97 (synapse-associated protein 97), une protéine d’échafaudage de type MAGUK (membrane-associated guanylate kinase) associée à la membrane, qui organise des complexes multiprotéiques à la membrane plasmique. SAP97 régule le trafic et la stabilisation des canaux ioniques et des récepteurs, notamment les récepteurs glutamatergiques de type AMPA/NMDA, et les relie au cytosquelette d’actine via des interactions impliquant les domaines PDZ, SH3 et GK. En coordonnant les jonctions cellule–cellule et la signalisation de polarité, DLG1 influence la plasticité synaptique, l’intégrité épithéliale et l’organisation de la synapse immunologique. La dérégulation des réseaux d’échafaudage associés à DLG1 a été étudiée dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ainsi que dans des modifications liées au cancer touchant l’adhérence, la migration et l’homéostasie de la signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SAP 97 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DLG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DLG1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DLG1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SAP 97.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DLG1 pour l'étude de la signalisation de SAP 97, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DLG1 essentiels à la fonction de SAP 97
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DLG1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SAP 97 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SAP 97 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DLG1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SAP 97 plasmide HDR (h) et le SAP 97 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DLG1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DLG1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.