Plasmide CRISPR/Cas9 KO SAP 49 (h2): sc-407057-KO-2

Présentation

SF3B4 code la sous-unité 4 du facteur d’épissage 3B (SAP49), un composant central du snRNP U2 au sein du complexe SF3b, qui favorise la reconnaissance fidèle du point de branchement et du site d’épissage 3′ lors de l’épissage du pré‑ARNm. En contribuant à l’assemblage et à la stabilisation des complexes A et B du spliceosome, SAP49 influence la sélection des isoformes de transcrits et soutient des programmes coordonnés d’expression génique liés à la progression du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la différenciation. La perturbation de la fidélité du spliceosome peut entraîner des modifications étendues de l’épissage alternatif et un remodelage du protéome, faisant de SF3B4 un nœud pertinent pour l’étude des réseaux de maturation de l’ARN dans les cellules humaines. Des altérations de l’expression de SF3B4 et un dysfonctionnement du spliceosome ont été associés à des états pathologiques dans lesquels un épissage aberrant contribue aux réponses au stress cellulaire et à une croissance dérégulée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SAP 49 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SF3B4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SF3B4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SF3B4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SAP 49.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SF3B4 pour l'étude de la signalisation de SAP 49, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SF3B4 essentiels à la fonction de SAP 49
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SF3B4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SAP 49 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SAP 49 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SF3B4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SAP 49 plasmide HDR (h) et le SAP 49 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SF3B4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SF3B4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.