Plasmide CRISPR d'Activation (h) SAP 18: sc-404214-ACT

SAP18 code pour SAP 18, un composant conservé du complexe corépresseur transcriptionnel Sin3A/HDAC, qui relie des répresseurs se liant à l’ADN à la désacétylation des histones et à la compaction de la chromatine. Par ce rôle, SAP 18 contribue à la régulation épigénétique de programmes d’expression génique contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la transcription induite par le stress. Des altérations des réseaux de corépresseurs et associés aux HDAC sont fréquemment impliquées dans des états transcriptionnels dérégulés observés en biologie du cancer et dans des troubles caractérisés par une régulation anormale de la chromatine. SAP 18 est donc couramment étudié dans le contexte de la dynamique de répression transcriptionnelle, du remodelage de la chromatine et du contrôle, au niveau des voies, de l’identité cellulaire.

SAP 18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SAP18 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SAP 18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SAP18 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SAP18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SAP 18. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SAP18 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SAP 18 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SAP 18 dans les cellules tumorales présentant une expression de SAP18 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.