Plasmide Double Nickase (h) SAP 155: sc-402925-NIC

SF3B1 code pour SAP 155, un composant central essentiel du sous-complexe SF3b au sein de la snRNP U2, qui contribue à définir le point de branchement et le site d’épissage 3′ lors de l’épissage du pré‑ARNm. Par son rôle dans l’assemblage du spliceosome et le choix des sites d’épissage, SAP 155 influence la diversité des isoformes de transcrits et relie le traitement de l’ARN au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la protéostasie. Une dérégulation de l’épissage dépendant de SF3B1 a été associée à une utilisation aberrante et étendue d’exons ainsi qu’à des programmes d’expression génique altérés dans de nombreux cancers et hémopathies malignes, ainsi qu’à d’autres troubles où la fidélité du spliceosome est compromise. Ainsi, SF3B1/SAP 155 est fréquemment étudié pour relier des perturbations de facteurs d’épissage à des modifications en aval des voies de signalisation et à des signatures d’épissage détectées par RNA‑seq.

SAP 155 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SF3B1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SF3B1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SF3B1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SF3B1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.