Plasmide CRISPR d'Activation (h) SAP 155: sc-402925-ACT

SF3B1 code pour SAP 155, un composant central du sous-complexe SF3b au sein de la snRNP U2, indispensable à la reconnaissance du point de branchement et à l’excision précise des introns lors de l’épissage du pré-ARNm. En contribuant à l’assemblage et à la stabilisation du spliceosome au niveau du site d’épissage 3′, SAP 155 influence des programmes d’épissage alternatif qui façonnent la diversité du protéome et coordonnent le traitement de l’ARN avec la régulation transcriptionnelle. La perturbation de la sélection des sites d’épissage dépendante de SF3B1 altère la maturation de l’ARN et peut modifier l’expression de voies contrôlant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la différenciation. SF3B1 est fréquemment étudié dans le contexte de la biologie du spliceosome et des défauts d’épissage associés aux maladies, où des variants codants récurrents sont liés à un épissage aberrant étendu et à un remaniement du transcriptome.

SAP 155 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SF3B1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SAP 155 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SF3B1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SF3B1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SAP 155. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SF3B1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SAP 155 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SAP 155 dans les cellules tumorales présentant une expression de SF3B1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.