Plasmide Double Nickase (h) SAP-1: sc-403868-NIC

ELK4 code pour le facteur de transcription SAP-1, à domaine ETS, un co-régulateur du serum response factor (SRF) qui se fixe sur les sites du facteur de complexe ternaire (TCF) au sein des éléments de réponse au sérum afin de contrôler les programmes de gènes à réponse immédiate. SAP-1 est phosphorylé en aval de la signalisation MAPK/ERK, reliant les signaux mitogènes et de stress à des sorties transcriptionnelles qui régissent la prolifération, la différenciation et l’expression génique dépendante des stimuli. En régulant des promoteurs tels que FOS et d’autres cibles sensibles aux signaux de croissance, ELK4 contribue à la progression du cycle cellulaire et aux réponses adaptatives aux signaux extracellulaires. Une activité dérégulée des facteurs ETS et un câblage altéré de la voie MAPK ont été associés à des états transcriptionnels oncogéniques, ce qui fait d’ELK4 un nœud utile pour étudier la transcription dépendante des signaux dans des contextes pertinents pour la maladie.

SAP-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ELK4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ELK4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ELK4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ELK4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.