SAMHD1 Double Nickase Plasmid (h): sc-406002-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SAMHD1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SAMHD1 Double-Nickase-Plasmid (h) und SAMHD1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SAMHD1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SAMHD1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406002-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SAMHD1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406002-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SAMHD1 kodiert eine dNTP-Triphosphohydrolase mit sterilem Alpha-Motiv und HD-Domäne, die die intrazellulären Desoxynukleotid-Pools reguliert und dazu beiträgt, die Genomstabilität während der DNA-Replikation und -Reparatur aufrechtzuerhalten. Durch die Kontrolle der dNTP-Verfügbarkeit und die Beteiligung an der Signalübertragung der DNA-Schadensantwort beeinflusst SAMHD1 die Zellzyklusprogression, die Toleranz gegenüber Replikationsstress sowie angeborene Immunwege, die mit der Nukleinsäure-Erkennung verknüpft sind. SAMHD1 ist außerdem an der Wirtsrestriktion von Retroelementen und der viralen Replikation beteiligt, indem es den Nukleotidstoffwechsel und die durch Nukleinsäuren ausgelöste Immun-Signalgebung moduliert. Eine fehlregulierte SAMHD1-Aktivität wurde mit entzündlichen Interferonopathien in Verbindung gebracht und im Kontext von Krebs untersucht, wo eine veränderte dNTP-Homöostase und Replikationsstress zur genomischen Instabilität beitragen.
SAMHD1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SAMHD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SAMHD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SAMHD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SAMHD1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.