Plasmide CRISPR/Cas9 KO SAMD4A (h): sc-406449

Présentation

SAMD4A (sterile alpha motif domain containing 4A) est une protéine régulatrice se liant à l’ARN, impliquée dans le contrôle post-transcriptionnel de l’expression génique via la reconnaissance de motifs spécifiques dans les ARNm cibles. Elle participe à la stabilité, à la localisation et à la répression de la traduction des ARNm, reliant ainsi l’activité de SAMD4A aux transitions d’état cellulaire et aux programmes d’adaptation au stress qui remodèlent le protéome. Par ces fonctions, SAMD4A peut influencer des voies contrôlant la prolifération, la différenciation et des sorties de signalisation liées à l’immunité en modulant la traduction des composants de ces voies. Une régulation altérée de SAMD4A a été étudiée dans le contexte de programmes d’expression génique associés au cancer et de phénotypes inflammatoires, où une dérégulation du métabolisme de l’ARN contribue à des comportements cellulaires pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SAMD4A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SAMD4A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SAMD4A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SAMD4A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SAMD4A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SAMD4A pour l'étude de la signalisation de SAMD4A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SAMD4A essentiels à la fonction de SAMD4A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SAMD4A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SAMD4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SAMD4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SAMD4A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SAMD4A plasmide HDR (h) et le SAMD4A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SAMD4A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SAMD4A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.