Plasmide Double Nickase (h) Sam 68: sc-401378-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Sam 68 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Sam 68 Double Nickase (h) et le plasmide Sam 68 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KHDRBS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Sam 68 Antibody (H-4): sc-514468
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Sam 68 | sc-401378-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Sam 68 | sc-401378-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KHDRBS1 code Sam 68, une protéine de liaison à l’ARN de la famille STAR qui couple la transduction du signal au métabolisme de l’ARN en régulant l’épissage alternatif, l’export des ARNm, leur stabilité et leur traduction. Sam 68 agit dans le noyau et le cytoplasme, et sa fonction est modulée par phosphorylation en aval de voies telles que les kinases de la famille Src et la MAPK, reliant ainsi la signalisation par les facteurs de croissance au choix des isoformes de transcrits. En contrôlant des programmes de maturation de l’ARN, KHDRBS1 influence la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et la dynamique du cytosquelette, et est fréquemment impliqué dans des phénotypes prolifératifs et invasifs dans des modèles liés au cancer. Une activité dérégulée de Sam 68 a également été associée à des altérations du traitement de l’ARN neuronal et à l’expression de gènes répondant au stress, soulignant son intérêt pour l’étude de l’épissage spécifique des tissus et des réseaux de régulation de l’ARN.
Sam 68 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KHDRBS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KHDRBS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KHDRBS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KHDRBS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.