Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sam 68: sc-401378-ACT

KHDRBS1 code pour Sam 68 (Src-associated in mitosis 68 kDa), une protéine de liaison à l’ARN de la famille STAR qui couple la transduction du signal au métabolisme de l’ARN. Sam 68 régule l’épissage alternatif, l’export des ARNm, leur stabilité et leur traduction via la liaison à des éléments riches en U/A, et son activité est modulée de manière dynamique par la phosphorylation et d’autres modifications post-traductionnelles. Elle participe à des voies liées à la progression du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et au remodelage du cytosquelette, en intégrant des signaux issus des kinases de la famille Src et des voies MAPK. Une activité dérégulée de Sam 68 a été associée à des programmes d’épissage altérés et à des profils d’expression génique aberrants observés dans de multiples modèles pertinents pour le cancer et la neurodégénérescence, ce qui en fait un nœud mécanistique d’intérêt pour la recherche sur le traitement de l’ARN.

Sam 68 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KHDRBS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sam 68 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KHDRBS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KHDRBS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sam 68. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KHDRBS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sam 68 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sam 68 dans les cellules tumorales présentant une expression de KHDRBS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.